00627942 1381 43513 حسينخاني، سامان علوم پايه بيوشيمي تثبيت ساختارهاي طبيعي و حدواسط آنزيم هاي لوسيفراز ، كربنيك انيدراز و گلوكزاكسيداز بربسترهاي هيدروفوبيك, /سامان حسينخاني؛ به راهنمايي: محسن نعمت گرگاني؛ استاد مشاور: حسين نادري منش. immobilization of native and intermediate structires of luciferase,Carbonic anhydrase and glucose oxidase on hydrophobic adsorbent 169، تصوير، جدول، نمودار، ديسكت TH وضعيت پايان نامه : در حال اجرا پايان نامه(دكتري)--دانشگاه تهران، مركز تحقيقات بيوشيمي و بيوفيزيك. كتابشناسي از ص. 154 تـا 169 پالميتيل‌سفارز به همراه دو بستر جديد اكتيل‌سفارز و دودسيل‌سفارز جهت تثبيت آنزيم‌ها و استفاده از فعاليت كاتاليتيكي آنها مورد استفاده قرار گرفتند. بعضي از آنزيم‌ها واجد قابليت اتصال در فرم طبيعي خود به اين بسترها مي‌باشند. در مقابل بعضي از آنزيم‌ها توانايي اتصال به اين سطوح را ندارند. از آنزيم‌هاي گروه اول كه در اين تحقيق مورد استفاده قرار گرفت آنزيم لوسيفراز باكتريايي از سه منبع مختلف بود و از گروه دوم مي‌توان به گلوكزاكسيداز، كربنيك‌انيدراز، اوره‌آز و ريبونوكلئاز اشاره نمود. با فرض وجود پاكت‌هاي هيدروفوب دروني در اين پروتئين‌ها و قابليت دسترسي به آنها در روشهاي Denaturation-Renaturation مي‌توان از حدواسط‌هاي ساختاري جهت تثبيت پروتئين‌ها استفاده نمود. درجه جايگزيني ليپيد برسطح سفارز براي پالميتيل‌سفارز (2/31)، دودسيل‌سفارز (12) و اكتيل‌سفارز (mM/Mgal 2/3) با استفاده از روش NMR تعيين گرديد. وجود گروههاي هيدروفوب سطحي در ساختارهاي طبيعي و حدواسط آنزيم‌هاي مختلف نيز با استفاده از ميزان افزايش نشر ANS تعيين گرديد. لوسيفراز باكتريايي از منبع ويبريوهاروي داراي بيشترين ميزان هيدروفوبيسيته سطحي و همچنين بيشترين درصد بازيافت فعاليت متعاقب اتصال به هر يك از بسترهاي فوق مي‌باشد. اين آنزيم در فرم تثبيت‌شده ضمن حفظ خصوصيات پايه سينتيكي خود داراي پايداري حرارتي قابل توجهي مي‌باشد. تثبيت همزمان (Coimmobilization) اين آنزيم با FMN ردوكتاز سبب افزايش فوق‌العاده‌اي در ميزان نشر نور در مقايسه با فرم آزاد گرديد. استفاده از روش دناتوراسيون حرارتي سبب افزايش ميزان تثبيت آنزيم كربنيك‌انيدراز به ميزان حداكثر بر روي هر سه بستر فوق‌الذكر شد. اين روش تثبيت سبب افزايش در پايداري حرارتي و مقاومت به pH به خصوص بر روي اكتيل‌سفارز و همچنين افزايش بازده كاتاليتيكي آنزيم (Kcat/Km) بر روي اكتيل‌سفارز در مقايسه با دو بستر ديگر گرديد. توده‌اي شدن و همچنين تثبيت كربنيك‌انيدراز در دماهاي بالا توسط پرولين مهار گرديد، بنابراين مكانيزم اتصال كربنيك‌انيدراز در اين شرايط با استفاده از تشكيل فرم‌هاي حدواسط شبيه به Molten globule مي‌باشد. مطالعات انجام شده در رابطه با آنزيم گلوكزاكسيداز نيز بيانگر جدا شدن FAD در دماي بالا متعاقب تثبيت بر بستر پالميتيل‌سفارز و همچنين وجود يك جايگاه آبگريز براي اتصال FAD مي‌باشد. استفاده از روشهاي دناتوراسيون شيميايي توسط اوره و گوانيدين هيدروكلرايد و اكتيل‌گلوكوپيرانوزيد نتوانست ميزان تثبيت گلوكزاكسيداز را افزايش دهد. استفاده از دترژان (پاك‌كننده) يوني DTAB توانست ضمن در معرض قرار دادن گروههاي آبگريز ميزان تثبيت آنزيم را به مقدار قابل توجهي افزايش دهد. مطالعات انجام شده در رابطه با آنزيم مولتي‌مر اوره‌آز نيز نشان داد كه ميزان تثبيت در شرايط مختلف براي فرم‌هاي ساختاري حدواسط اين آنزيم با ميزان اتصال مولكول گزارشگر ANS مطابقت دارد.در مجموع اطلاعات حاصل از اين پايان‌نامه ضمن تشكيل فرم‌هاي تثبيت شده فعال از ساختارهاي حدواسط و طبيعي آنزيم، اطلاعاتي نيز در رابطه با تاخوردگي پروتئين در اختيار قرار داد. به زبان فارسي؛ چكيده به زبان فارسي، انگليسي لوسيفراز / كربنيك انيدراز / گلوكز اكسيداز / تركيب آبگريز / بي‌جنبش‌سازي آنزيم / حدواسط / آنزيم‌ luciferase / Carbonic anhydrase / Glucose oxidase / hydrophobic compound / Enzyme Immobilization / intermediate / Enzyme نعمت گرگاني، محسن, ار / نادري منش، حسين, ام دانشگاه تهران، مركز تحقيقات بيوشيمي و بيوفيزيك دانشگاه تهران، مركز تحقيقات بيوشيمي و بيوفيزيك